Eskerrik asko Nature.com bisitatzeagatik. Erabiltzen ari zaren arakatzailearen bertsioak CSS laguntza mugatua du. Emaitza onenak lortzeko, arakatzaile berriagoa erabiltzea gomendatzen dugu (edo Internet Explorer-en bateragarritasun modua desgaitzea). Bitartean, laguntza etengabea bermatzeko, gunea estilorik eta JavaScript gabe bistaratuko dugu.
Aldaketa modikoko animalia-ereduak (MC) ezartzea oinarri garrantzitsua da MC aztertzeko. Zeelanda Berriko berrogeita hamalau untxi zuriak faltsu-eragiketa taldeetan, muskulu-inplantazio-taldeetan (ME taldea) eta nucleus pulposus inplantazio-taldeetan (NPE taldea) banatu ziren. NPE taldean, orno arteko diskoa anterolateral lumbar hurbilketa kirurgikoarekin agerian geratu zen eta orratz bat erabili zen L5 orno-gorputza amaierako plakatik gertu zulatzeko. NP L1/2 orno arteko diskotik xiringa baten bidez atera zen eta bertan injektatu zen. Hezur subkondralean zulo bat egitea. Muskulu-inplantazio-taldeko eta iruzur-eragiketa-taldeko prozedura kirurgikoak eta zulaketa-metodoak NP inplantazio-taldeko berdinak izan ziren. ME taldean, gihar zati bat zuloan sartu zen, eta iruzur-eragiketa taldean, berriz, ez zen ezer sartu zuloan. Ebakuntzaren ostean, MRI eskaneatzea eta proba biologiko molekularra egin ziren. NPE taldean seinalea aldatu egin zen, baina ez zen seinale aldaketa nabaririk izan faltsu-eragiketa taldean eta ME taldean. Behaketa histologikoak erakutsi zuen ehunen ugalketa anormala antzeman zela inplantazio-gunean, eta IL-4, IL-17 eta IFN-γ-en adierazpena handitu egin zen NPE taldean. NP hezur subkondralean ezartzeak MCren animalia-eredu bat sor dezake.
Aldaketa modikoak (MC) orno-plaken eta aldameneko hezur-muinaren lesioak dira erresonantzia magnetikoko irudian (MRI). Sintomak elkartuta dituzten pertsonengan nahiko ohikoak dira1. Ikerketa askok azpimarratu dute MCren garrantzia, bizkarreko minarekin (LBP) asoziatzeagatik2,3. de Roos et al.4 eta Modic et al.5 modu independentean lehen aldiz deskribatu zituzten orno-muineko seinale subkondralen anomaliak hiru mota ezberdin. I motako aldaketak hipointensoak dira T1 haztatutako (T1W) sekuentzian eta hiperintensoak T2 haztatutako (T2W) sekuentzian. Lesio honek hezur-muineko arraildura-mutur-plakak eta ondoko pikortze-ehun baskularra erakusten ditu. Modic II motako aldaketek seinale altua erakusten dute T1W zein T2W sekuentzian. Lesio mota honetan, muturreko plaka suntsitzea aurki daiteke, baita ondoko hezur-muinaren gantz ordezkapen histologikoa ere. Modic III motako aldaketek seinale baxua erakusten dute T1W eta T2W sekuentzietan. Amaiera-plakei dagozkien lesio esklerotikoak ikusi dira6. MC bizkarrezurraren gaixotasun patologikotzat hartzen da eta bizkarrezurreko gaixotasun endekapenezko askorekin oso lotuta dago 7,8,9.
Eskura dauden datuak kontuan hartuta, hainbat ikerketek MCren etiologia eta mekanismo patologikoei buruzko ikuspegi zehatza eman dute. Albert et al. MC disko hernia batek eragin dezakeela iradoki zuen8. Hu et al. MC diskoaren endekapen larria egotzi zion10. Kroc-ek "barne-disko haustura" kontzeptua proposatu zuen, zeinak disko-trauma errepikakorrak muturreko plakan mikrourraketak ekar ditzakeela dio. Arraildura eratu ondoren, nukleo pulposusaren (NP) amaierako plaka suntsitzeak erantzun autoimmune bat eragin dezake, eta horrek MC11 garatzen du. Ma et al. antzeko ikuspegia partekatu zuen eta NP-k eragindako autoimmunitateak funtsezko eginkizuna betetzen duela jakinarazi zuen MC12-ren patogenian.
Immunitate-sistemako zelulek, batez ere CD4+ T laguntzaile linfozitoek, zeregin kritikoa dute autoimmunitatearen patogenian13. Duela gutxi aurkitutako Th17 azpimultzoak IL-17 zitokina proinflamatorioa sortzen du, kimiokinen adierazpena sustatzen du eta kaltetutako organoetan T zelulak estimulatzen ditu IFN-γ14 ekoizteko. Th2 zelulek ere zeregin berezia dute erantzun immuneen patogenian. IL-4 Th2 zelula adierazgarri gisa adierazteak ondorio immunopatologiko larriak ekar ditzake15.
Azterketa kliniko asko MC16,17,18,19,20,21,22,23,24-ri buruz egin diren arren, oraindik gizakietan maiz gertatzen den eta maiz gertatzen den MC prozesua imita dezaketen animalia-eredu esperimental egokirik falta da. etiologia edo tratamendu berriak ikertzeko erabiltzen da, hala nola terapia zuzendua. Orain arte, MCren animalia-eredu gutxi batzuk baino ez dira azpian dauden mekanismo patologikoak aztertzen dituztela.
Albert eta Ma-k proposatutako teoria autoimmunean oinarrituta, ikerketa honek untxiaren MC eredu sinple eta erreproduzigarria ezarri zuen NP zulatutako muturreko plakaren ondoan NP autotransplantatuz. Beste helburu batzuk animalia-ereduen ezaugarri histologikoak behatzea eta NPren mekanismo espezifikoak ebaluatzea dira MCren garapenean. Horretarako, biologia molekularra, MRI eta azterketa histologikoak bezalako teknikak erabiltzen ditugu MCren progresioa aztertzeko.
Bi untxi odoljarioz hil ziren ebakuntzan, eta lau untxi hil ziren anestesian erresonantzia magnetikoan. Gainerako 48 untxiak bizirik atera ziren eta ez zuten jokabide-zeinurik edo neurologikoki seinalerik erakutsi ebakuntzaren ondoren.
MRI-k erakusten du zulo ezberdinetan txertatutako ehunaren seinalearen intentsitatea ezberdina dela. NPE taldeko L5 orno-gorputzaren seinalearen intentsitatea pixkanaka aldatu zen txertatu eta 12, 16 eta 20 asteetan (T1W sekuentzia seinale baxua erakutsi zuen, eta T2W sekuentzia seinale mistoa gehi seinale baxua) (1C. irudia), MRI agerraldietan txertatutako zatien beste bi taldeetatik nahiko egonkor mantendu ziren aldi berean (1A, B irudiak).
(A) Untxiaren gerri-bizkarrezurreko MRI sekuentzialak 3 denbora-puntutan. Seinaleen anomaliarik ez da aurkitu faltsu-eragiketa taldearen irudietan. (B) ME taldeko orno-gorputzaren seinale-ezaugarriak itxurazko eragiketa-taldekoen antzekoak dira, eta denboran zehar ez da seinale aldaketa nabarmenik ikusten. (C) NPE taldean, seinale baxua argi eta garbi ikusten da T1W sekuentzian, eta seinale mistoa eta seinale baxua argi ikusten dira T2W sekuentzian. 12 asteko alditik 20 asteko aldira, T2W sekuentziako seinale baxuen inguruko seinale altu puntualak gutxitzen dira.
NPE taldean hezur-hiperplasia nabaria ikus daiteke orno-gorputzaren inplantazio-gunean, eta hezur-hiperplasia azkarrago gertatzen da 12 eta 20 aste (2C. irudia) NPE taldearekin alderatuta, ez da aldaketa esanguratsurik ikusten modelatutako ornoetan. gorputzak; Sham taldea eta ME taldea (2C. irudia) 2A,B).
(A) Inplantatutako zatian orno-gorputzaren gainazala oso leuna da, zuloa ondo sendatzen da eta ez dago hiperplasiarik orno-gorputzean. (B) ME taldean inplantatutako gunearen forma itxurazko eragiketa taldean dagoenaren antzekoa da, eta ez dago denboran zehar inplantatutako gunearen itxuran aldaketa nabaririk. (C) Hezur-hiperplasia NPE taldeko inplantatutako gunean gertatu zen. Hezur-hiperplasia azkar handitu zen eta orno arteko diskoan zehar hedatu zen orno kontrako gorputzera.
Analisi histologikoak hezurren eraketari buruzko informazio zehatzagoa eskaintzen du. 3. irudian H&Ez tindatutako ebakuntza osteko atalen argazkiak erakusten dira. Faltsu operazio taldean, kondrozitoak ondo antolatuta zeuden eta ez zen zelula-ugalketarik hauteman (3A. irudia). ME taldeko egoera itxurazko eragiketa taldekoaren antzekoa zen (3B. irudia). Hala ere, NPE taldean, kondrozito ugari eta NP antzeko zelulen ugalketa ikusi ziren inplantazio-gunean (3C. irudia);
(A) Trabekulae amaierako plakaren ondoan ikus daitezke, kondrozitoak txukun antolatuta daude zelula tamaina eta forma uniformearekin eta ugaltzerik gabe (40 aldiz). (B) ME taldeko inplantazio-gunearen egoera faltsu-taldearen antzekoa da. Trabekulak eta kondrozitoak ikus daitezke, baina ez dago ugaltze agerikorik ezartzeko gunean (40 aldiz). (B) Kondrozitoak eta NP antzeko zelulak nabarmen ugaritzen direla ikus daiteke, eta kondrozitoen forma eta tamaina irregularrak direla (40 aldiz).
NPE eta ME taldeetan interleukin 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA eta interferon γ (IFN-γ) mRNAren adierazpena ikusi da. Xede-geneen adierazpen-mailak alderatu zirenean, IL-4, IL-17 eta IFN-γ-en gene-adierazpenak nabarmen handitu ziren NPE taldean ME taldekoekin eta faltsu-eragiketa taldearekin alderatuta (4. irudia) (P < 0,05). Faltsu operazio taldearekin alderatuta, IL-4, IL-17 eta IFN-γ-en adierazpen-mailak ME taldean apur bat igo ziren eta ez ziren aldaketa estatistikoetara iritsi (P > 0,05).
NPE taldeko IL-4, IL-17 eta IFN-γren mRNA adierazpenak itxurazko eragiketa taldean eta ME taldean baino joera nabarmen handiagoa erakutsi zuen (P < 0,05).
Aitzitik, ME taldeko espresio-mailek ez zuten alde nabarmenik erakutsi (P>0,05).
Western blot analisia IL-4 eta IL-17ren aurkako antigorputzak erabiliz egin zen, aldatutako mRNA adierazpen-eredua baieztatzeko. 5A, B irudietan erakusten den moduan, ME taldearekin eta faltsu operazio taldearekin alderatuta, NPE taldeko IL-4 eta IL-17 proteina mailak nabarmen handitu ziren (P < 0,05). Faltsu operazio taldearekin alderatuta, IL-4 eta IL-17 proteina-mailak ME taldean ere ez ziren estatistikoki aldaketa esanguratsuak lortu (P> 0,05).
(A) NPE taldeko IL-4 eta IL-17 proteina mailak ME taldeko eta plazebo taldekoak baino nabarmen handiagoak izan ziren (P < 0,05). (B) Western blot histograma.
Kirurgian lortutako giza lagin kopuru mugatua dela eta, MCren patogeniari buruzko azterketa argi eta zehatzak zailak dira. MCren animalia-eredu bat ezartzen saiatu gara bere mekanismo patologiko potentzialak aztertzeko. Aldi berean, ebaluazio erradiologikoa, ebaluazio histologikoa eta ebaluazio biologiko molekularra erabili ziren NP autoinjertoak eragindako MCaren ibilbidea jarraitzeko. Ondorioz, NP inplantazio-ereduak seinalearen intentsitatearen aldaketa pixkanaka eragin zuen 12 astetik 20 asteko denbora-puntuetara (seinale baxua nahastuta T1W sekuentzietan eta seinale baxua T2W sekuentzian), ehunen aldaketak eta histologikoak eta molekularrak adieraziz. ebaluazio biologikoek azterketa erradiologikoaren emaitzak baieztatu zituzten.
Esperimentu honen emaitzek erakusten dute NPE taldeko orno-gorputzaren hausturaren lekuan aldaketa bisualak eta histologikoak gertatu zirela. Aldi berean, IL-4, IL-17 eta IFN-γ geneen adierazpena ikusi zen, baita IL-4, IL-17 eta IFN-γ ere, ornoko nukleo autologoko pulposus ehunaren urratzea adieraziz. gorputzak seinale eta aldaketa morfologiko batzuk eragin ditzake. Erraza da aurkitzea animalia-ereduaren orno-gorputzen seinale-ezaugarriak (seinale baxua T1W sekuentzian, seinale mistoa eta seinale baxua T2W sekuentzian) giza orno-zelulen oso antzekoak direla, eta MRI ezaugarriak ere berretsi histologia eta anatomia gordinaren behaketak, hau da, orno-gorputzaren zelulen aldaketak progresiboak dira. Trauma akutuek eragindako hanturazko erantzuna zulatu eta berehala ager daitekeen arren, MRI emaitzek erakutsi zuten seinale aldaketak pixkanaka handitzen ari zirela zulatu eta 12 aste geroago agertzen zirela eta 20 astera arte iraun zutela MRI aldaketak berreskuratu edo itzultzeko zantzurik gabe. Emaitza hauek iradokitzen dute NP orno autologoa untxietan MV progresiboa ezartzeko metodo fidagarria dela.
Zulatze-eredu honek trebetasun, denbora eta esfortzu kirurgiko egokiak behar ditu. Aurretiazko esperimentuetan, lotailu-egitura paravertebralen disekzioak edo gehiegizko estimulazioak orno-osteofitoak sortzea eragin dezake. Kontuz ibili behar da aldameneko diskoak ez hondatzeko edo ez narritatzeko. Emaitza koherenteak eta erreproduzigarriak lortzeko sartze-sakonera kontrolatu behar denez, eskuz egin dugu tapoi bat 3 mm luzeko orratz baten zorroa moztuz. Tapoi hau erabiltzeak orno-gorputzean zulatzeko sakonera uniformea bermatzen du. Aurretiazko esperimentuetan, operazioan parte hartu zuten hiru ortopediko zirujauek 16 galgako orratzak errazagoak aurkitu zituzten 18 galgako orratzak edo beste metodo batzuekin baino. Zulaketa garaian gehiegizko odoljarioa saihesteko, orratza geldirik edukitzeak txertatzeko zulo egokiagoa emango du, horrela MC maila jakin bat kontrolatu daitekeela iradokiz.
Ikerketa askok MC jomugan jarri duten arren, ezer gutxi dakigu MC25,26,27-ren etiologiari eta patogeniari buruz. Gure aurreko ikerketetan oinarrituta, aurkitu dugu autoimmunitateak funtsezko eginkizuna duela MC12ren agerpenean eta garapenean. Ikerketa honek IL-4, IL-17 eta IFN-γren adierazpen kuantitatiboa aztertu du, hauek baitira antigenoaren estimulazioaren ondoren CD4+ zelulen bereizketa bide nagusiak. Gure ikerketan, talde negatiboarekin alderatuta, NPE taldeak IL-4, IL-17 eta IFN-γ-en adierazpen handiagoa izan zuen, eta IL-4 eta IL-17 proteina-mailak ere handiagoak izan ziren.
Klinikoki, IL-17 mRNAren adierazpena handitu egiten da disko-hernia duten pazienteen NP zeluletan28. IL-4 eta IFN-γ espresio-maila handitu ere aurkitu zen disko herniazio ez-konpresibo akutu batean kontrol osasuntsuekin alderatuta29. IL-17-k funtsezko eginkizuna du hanturan, ehunen lesioetan gaixotasun autoimmuneetan30 eta IFN-γ31-ren erantzun immunea hobetzen du. IL-17 bidezko ehun-lesio hobetua jakinarazi da MRL/lpr saguetan32 eta autoimmunitatearekiko sentikorrak diren saguetan33. IL-4-k zitokin proinflamatorioen (adibidez, IL-1β eta TNFα) eta makrofagoen aktibazioa inhibitu ditzake34. Jakinarazi zen IL-4-ren mRNA adierazpena desberdina zela NPE taldean IL-17 eta IFN-γrekin alderatuta une berean; NPE taldean IFN-γ-ren mRNA adierazpena beste taldeetakoa baino nabarmen handiagoa izan zen. Hori dela eta, IFN-γ ekoizpena NP arteko interkalazioak eragindako hanturazko erantzunaren bitartekaria izan daiteke. Ikerketek frogatu dute IFN-γ zelula-mota anitzek ekoizten dutela, 1 motako T zelula laguntzaile aktibatuak, zelula hiltzaile naturalak eta makrofagoak barne35,36, eta erantzun immunologikoak sustatzen dituen giltzarria den hanturazko zitokina da37.
Ikerketa honek iradokitzen du erantzun autoimmuneak MCren agerpenean eta garapenean parte hartu dezakeela. Luoma et al. aurkitu zuen MCren eta NP nabarmenaren seinalearen ezaugarriak antzekoak direla MRIn, eta biek seinale handia erakusten dute T2W sekuentzian38. Zitokina batzuk MCren agerraldiarekin estu lotuta daudela baieztatu da, hala nola IL-139. Ma et al. NPren goranzko edo beheranzko irtenaldiak eragin handia izan dezakeela MC12ren agerpenean eta garapenean. Bobechko40 eta Herzbein et al.41ek jakinarazi zuten NP jaiotzetik zirkulazio baskularra sartu ezin den ehun immunotolerantea dela. NP irtenguneek gorputz arrotzak sartzen dituzte odol-horniduran, eta, horrela, tokiko erreakzio autoimmuneen bitartekaritza egiten dute42. Erreakzio autoimmuneek faktore immune ugari eragin ditzakete, eta faktore horiek etengabe ehunen eraginpean daudenean, seinaleztapenean aldaketak eragin ditzakete43. Ikerketa honetan, IL-4, IL-17 eta IFN-γ-ren gainespresioa faktore immune tipikoak dira, NP eta MCs44-ren arteko harreman estua gehiago frogatuz. Animalia-eredu honek ondo imitatzen du NPren aurrerapena eta amaierako plakan sartzea. Prozesu honek are gehiago agerian utzi zuen autoimmunitateak MCn duen eragina.
Espero bezala, animalia-eredu honek MC aztertzeko plataforma posible bat eskaintzen digu. Hala ere, eredu honek oraindik muga batzuk ditu: lehenik eta behin, animaliak behatzeko fasean, erdiko faseko untxi batzuk eutanasia egin behar dira biologia histologikoa eta molekularra probak egiteko, eta, beraz, animalia batzuk denboran zehar "erabiltzen ez dira". Bigarrenik, ikerketa honetan hiru denbora-puntu ezartzen diren arren, zoritxarrez, MC mota bakarra modelatu dugu (Modic I motako aldaketa), beraz, ez da nahikoa giza gaixotasunaren garapen-prozesua irudikatzea, eta denbora-puntu gehiago ezarri behar dira. hobeto behatu seinale aldaketa guztiak. Hirugarrenik, ehunen egituraren aldaketak tindaketa histologikoaren bidez argi ikus daitezke, baina teknika espezializatu batzuek eredu honen mikroegitura-aldaketak hobeto ezagut ditzakete. Esaterako, argi polarizatuaren mikroskopia erabili zen untxi-orno arteko diskoetan fibrokartilagoaren eraketa aztertzeko45. NPren epe luzerako efektuak MC eta amaierako plakan gehiago aztertzea eskatzen du.
Zeelanda Berriko berrogeita hamalau untxi zuri ar (2,5-3 kg inguruko pisua, 3-3,5 hilabeteko adina) ausaz banatu ziren faltsu-eragiketa taldeetan, muskulu-inplantazio-taldeetan (ME taldea) eta nerbio-sustraietan inplantatzeko taldeetan (NPE taldea). Prozedura esperimental guztiak Tianjin Ospitaleko Etika Batzordeak onartu zituen, eta metodo esperimentalak onartutako jarraibideen arabera egin ziren.
Hobekuntza batzuk egin dira S. Sobajimaren teknika kirurgikoan 46 . Untxi bakoitza alboko etzanda posizioan jarri zen eta ondoz ondoko bost lumbar-intervertebral diskoen (IVD) aurreko gainazala agerian geratu zen posterolateral retroperitoneal hurbilketa erabiliz. Untxi bakoitzari anestesia orokorra eman zitzaion (% 20 uretanoa, 5 ml/kg belarriko zainaren bidez). Luzetarako larruazaleko ebakidura bat egin zen saihetsen beheko ertzetik pelbiseko ertzeraino, muskulu paravertebraletatik 2 cm-ra bentrala. L1-tik L6-ra arteko eskuineko bizkarrezurra anterolateralaren gainean zegoen larruazalpeko ehunaren, ehun erretroperitonealaren eta muskuluen disekzio zorrotz eta zorrotzaren bidez agerian geratu zen (6A. irudia). Diskoaren maila pelbiseko ertza erabiliz L5-L6 disko mailarako mugarri anatomiko gisa zehaztu zen. Erabili 16 galgako zulatze-orratz bat L5 ornoaren amaierako plakaren ondoan zulo bat zulatzeko 3 mm-ko sakoneran (6B. irudia). Erabili 5 ml-ko xiringa bat L1-L2 orno arteko diskoan nukleo pulposo autologoa aspiratzeko (6C. irudia). Kendu nukleo pulposoa edo muskulua talde bakoitzaren eskakizunen arabera. Zulaketa-zuloa sakondu ondoren, jostura xurgagarriak fascia sakonean, azaleko faszian eta azalean jartzen dira, kirurgian zehar orno-gorputzaren ehun periostioa ez kaltetzeko zainduz.
(A) L5-L6 diskoa hurbilketa posterolateral retroperitoneal baten bidez azaltzen da. (B) Erabili 16 galgako orratz bat L5 amaierako plakaren ondoan zulo bat egiteko. (C) MF autologoak biltzen dira.
Anestesia orokorra % 20ko uretanoarekin (5 ml/kg) belarriko zainaren bidez administratu zen, eta gerrialdeko bizkarrezurreko erradiografiak errepikatu ziren ebakuntza osteko 12, 16 eta 20 asteetan.
Untxiak ketamina (25,0 mg/kg) eta sodio pentobarbital (1,2 g/kg) muskulu barneko injekzio bidez sakrifikatu ziren kirurgia egin eta 12, 16 eta 20 asteetan. Bizkarrezurra osoa kendu zen analisi histologikoa egiteko eta benetako analisia egin zen. Alderantzizko transkripzio kuantitatiboa (RT-qPCR) eta Western blotting erabili ziren faktore immuneen aldaketak detektatzeko.
MRI azterketak untxietan egin ziren 3.0 T-ko iman kliniko bat erabiliz (GE Medical Systems, Florence, SC) gorputz-adarretako bobina-hargailu ortogonal batekin hornituta. Untxiak % 20ko uretanoarekin (5 ml/kg) anestesiatu zituzten belarriaren zainaren bidez eta, ondoren, imanaren barnean jarri ziren lumbar-eskualdea 5 hazbeteko diametroko gainazaleko bobina zirkular batean zentratuta (GE Medical Systems). T2 haztaturiko koronalaren irudiak (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) lumbar diskoaren kokapena definitzeko eskuratu ziren L3-L4-tik L5-L6-ra. Plano sagitalaren T2 haztatutako xerrak ondoko ezarpenekin eskuratu ziren: spin-oihartzun sekuentzia azkarra 2200 ms-ko errepikapen-denbora (TR) eta 70 ms-ko oihartzun-denbora (TE), matrizea; 260 eta zortzi estimuluko ikusmen eremua; Ebaketa-lodiera 2 mm-koa zen, tartea 0,2 mm-koa.
Azken argazkia atera eta azken untxia hil ondoren, itxurazko, giharretako eta NP diskoak kendu ziren azterketa histologikoa egiteko. Ehunak % 10eko buffered formalin neutroan finkatu ziren astebetez, azido etilendiaminotetraacetikoarekin deskaltzifikatu eta parafina zatitu. Ehun-blokeak parafinan txertatu eta sekzio sagitaletan moztu ziren (5 μm-ko lodiera) mikrotomo baten bidez. Atalak hematoxilinaz eta eosinaz (H&E) tindatu ziren.
Talde bakoitzeko untxien orno arteko diskoak bildu ondoren, RNA osoa atera zen UNIQ-10 zutabe bat erabiliz (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., China) fabrikatzailearen argibideen arabera eta ImProm II alderantzizko transkripzio sistema baten arabera (Promega Inc. , Madison, WI, AEB). Alderantzizko transkripzioa egin zen.
RT-qPCR Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., AEB) eta SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, AEB) erabiliz egin zen fabrikatzailearen argibideen arabera. PCR erreakzio-bolumena 20 μl-koa izan zen eta 1,5 μl cDNA diluitua eta 0,2 μM abiarazte bakoitzeko zituen. Primerak OligoPerfect Designer-ek (Invitrogen, Valencia, CA) diseinatu zituen eta Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd.-ek (Txina) fabrikatu zituen (1. taula). Ziklo termikoko baldintza hauek erabili ziren: polimerasa aktibatzeko hasierako urratsa 94°C-tan 2 min, gero 15 s-ko 40 ziklo bakoitza 94°C txantiloiaren desnaturalizaziorako, 1 min 60°C-tan annealing, luzapena eta fluoreszentzia. neurketak 1 minutuz egin dira 72 °C-tan. Lagin guztiak hiru aldiz handitu ziren eta batez besteko balioa RT-qPCR analisirako erabili zen. Anplifikazio-datuak FlexStation 3 erabiliz analizatu dira (Molecular Devices, Sunnyvale, CA, AEB). IL-4, IL-17 eta IFN-γ geneen adierazpena kontrol endogenora (ACTB) normalizatu zen. Helburuko mRNAren adierazpen maila erlatiboak 2-ΔΔCT metodoa erabiliz kalkulatu ziren.
Proteina osoa ehunetatik atera zen RIPA lysis buffer-eko ehun homogeneizatzaile bat erabiliz (proteasa eta fosfatasa inhibitzaile koktela duena) eta gero zentrifugatu zen 13.000 rpm-an 20 minutuz 4 ° C-tan ehun-hondakinak kentzeko. Berrogeita hamar mikrogramo proteina kargatu ziren errei bakoitzeko, %10eko SDS-PAGEz bereizita, eta ondoren PVDF mintz batera transferitu ziren. Blokeatzea % 5eko gantz gabeko esne lehor batean egin zen, % 0,1 Tween 20 duen Tris-buffered saline (TBS) ordubetez giro-tenperaturan. Mintza untxiaren aurkako antigorputz primarioarekin inkubatu zen (1:200 diluitua; Boster, Wuhan, Txina) (1:200 diluitua; Bioss, Beijing, Txina) gau osoan 4 °C-tan eta bigarren egunetan erreakzionatu zuten; bigarren mailako antigorputzarekin (ahuntz-untxiaren aurkako G immunoglobulina 1:40.000 diluzioan) erradiko peroxidasarekin konbinatuta (Boster, Wuhan, Txina) ordubetez giro-tenperaturan. Western blot seinaleak X izpien irradiazioaren ondoren mintz kimilumineszentearen kimilumineszentzia handituz detektatu ziren. Analisi dentsitometrikoa egiteko, BandScan softwarea erabiliz blots eskaneatu eta kuantifikatu ziren eta emaitzak xede-genearen immunoreaktibitatearen eta tubulinaren immunoreaktibitatearen erlazioa bezala adierazi ziren.
Kalkulu estatistikoak SPSS16.0 software paketearen bidez egin dira (SPSS, AEB). Azterlanean bildutako datuak batez besteko ± desbideratze estandar gisa adierazi ziren (batez bestekoa ± SD) eta norabide bakarreko errepikatutako neurrien analisia (ANOVA) erabiliz aztertu ziren bi taldeen arteko desberdintasunak zehazteko. P < 0,05 estatistikoki esanguratsutzat jo zen.
Horrela, MCren animalia-eredu bat ezartzea orno-gorputzean NP autologoak ezarriz eta behaketa makroanatomikoa, MRI analisia, ebaluazio histologikoa eta analisi biologiko molekularra eginez, giza MCren mekanismoak ebaluatu eta ulertzeko eta terapeutiko berriak garatzeko tresna garrantzitsua izan daiteke. esku-hartzeak.
Nola aipatu artikulu hau: Han, C. et al. Modic-en aldaketen animalia-eredu bat ezarri zen nukleo pulposo autologoa gerriko bizkarrezurreko hezur azpikondralean ezarriz. Zientzia. 6. Rep., 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J. eta Boos, N. Lumbar bizkarrezurraren erresonantzia magnetikoaren irudia: disko herniaren eta atxikipenaren prebalentzia, nerbio-sustraiaren konpresioa, amaierako plakaren anomaliak eta artikulazioko artrosia boluntario asintomatikoetan. . tasa. Erradiologia 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS eta Leboeuf-Eed, K. Modic aldaketak eta aurkikuntza klinikoekin duten erlazioa. European Spine Journal: European Spine Society, the European Society of Spinal Deformity eta the European Society for Cervical Spine Research 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Aldaketa modukoak gerrialdeko orno-plaketan: prebalentzia eta lotura bizkarreko minarekin eta ziatikarekin adin ertaineko gizonezko langileetan. Bizkarrezurra 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. eta Dalinka, M. Hezur-muinaren MRI-ren amaierako plakaren ondoan aldatzen da lumbar bizkarrezurraren gaixotasun degeneratiboan. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ eta Carter, JR Disko endekapenezko gaixotasuna: orno-muineko aldaketen ebaluazioa MRIarekin. Erradiologia 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS eta Carter, JR Disko endekapenezko gaixotasunaren irudia. Erradiologia 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Neovertebral endplate (Modic) seinale-aldaketen iragarleak populazio orokorrean. European Spine Journal: European Spine Society, the European Society of Spinal Deformity eta the European Society for Cervical Spine Research, Division 19, 129-135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB eta Mannisch, K. Modic aldaketak lumbar disko herniation ondoren. European Spine Journal : European Spine Society, the European Society of Spinal Deformity eta the European Society for Cervical Spine Research 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., eta Kaapa, E. Modic I motako aldaketek deformazio-diskoen endekapen azkar progresiboa iragar dezakete: 1 urteko azterketa prospektiboa. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ eta Fan, SW Modic aldaketak: kausa posibleak eta lumbar diskoaren endekapenerako ekarpena. Hipotesi Medikoak 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Barne-disko haustura. 50 urte baino gehiagoko disko-prolapsoaren arazoak. Bizkarrezurra (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Argitalpenaren ordua: 2024-12-13