Eskerrik asko natura bisitatzeagatik. Erabiltzen ari zaren arakatzailearen bertsioak CSS laguntza mugatua du. Emaitza onenak lortzeko, arakatzaile berriagoa erabiltzea gomendatzen dugu (edo Internet Explorer-en bateragarritasun modua desgaitzea). Bitartean, laguntza jarraitua bermatzeko, gunea estilo eta javascript gabe bistaratuko dugu.
Aldaketa modikoko animalien ereduak ezartzea (MC) oinarri garrantzitsua da MC ikasteko. Berrogeita hamalau Zeelanda Zeelanda Zeeliko Zuriak Sham-operazioko taldean banatu ziren, muskulu inplantazio taldea (Me Taldea) eta Nukleoaren Pulposus inplantazio taldea (NPE taldea). NPE taldean, disko intervertebral lumbar ikuspegi kirurgiko anterolateralen eraginpean zegoen eta orratz bat L5 ornodun gorputza zulatzeko erabili zen amaierako plakaren ondoan. NP L1 / 2 disko intervertetetik atera zen xiringa eta injektatu. Hezur azpikondraboan zulo bat zulatzea. Gihar inplantazio taldeko prozedura eta zulaketa metodoak eta The Sham-operazio taldea NP inplantazio taldean zeuden berdina izan ziren. Me taldean, gihar zati bat zulora sartu zen, eta lotsagabean zegoen taldean, ez zen ezer zulora sartu. Eragiketa egin ondoren, MRI eskaneatzea eta proba biologiko molekularrak egin ziren. NPE taldeko seinalea aldatu egin zen, baina ez zen sham-operazio taldean eta me taldean ez zegoen seinale aldaketarik. Behaketa histologikoak erakutsi zuen ehunen ugaritze anormala inplantazio gunean ikusi zela eta IL-4, IL-17 eta IFN-γ IFN-ren adierazpena NPE taldean handitu zela. NP-k hezur subkorantzan inplantatzea MCko animalia eredua eratu dezake.
Aldaketa modikoak (MC) amaiera ornodunen eta ondoko hezur-muineko lesioak dira, erresonantzia magnetikoen irudian (MRI) ikusgai. Nahiko ohikoak dira erlazionatutako sintomak dituzten partikularretan1. Ikerketa askok azpimarratu dute MCren garrantzia bizkarreko mina baxua (LBP) 2,3. De Roos et al.4 eta modikoa eta al.5 modu independentean deskribatu dira lehen aldiz hezur-muineko ornodunen anormalitate subkorantzak. Mota modiala I Aldaketak T1-ponderatutako (T1W) sekuentziak eta hiperintentsioak dira T2-Pendeetako (T2W) sekuentzietan. Lesio horrek hezur-muinean dagoen granulazio basastikoko ehunak eta aldameneko granulazio ehun baskularra erakusten ditu. II Mota Mota Aldaketak Seinale altua erakusten du T1W eta T2W sekuentzietan. Lesio mota horretan, Destruction amaierako suntsipena aurki daiteke, baita ondoko hezur-muinaren gantz histologikoa ere. III Mota Mota Aldaketak Seinale baxua erakusten du T1W eta T2W sekuentzietan. Amaierari dagozkion lesio esklerotikoak ikusi dira6. MC bizkarrezurraren gaixotasun patologikoa da eta bizkarrezurraren endekapenezko gaixotasun ugarirekin lotuta dago7,8,9.
Eskuragarri dauden datuak kontuan hartuta, hainbat ikerketek ikuspegi zehatzak eman dituzte Etiologian eta MC-ko mekanismo patologikoei. Albert et al. iradokitzen du MC diskoaren herniation8 dela. Hu et al. Disko degenerazio larria duen MC-ri egotzita. Kroc-ek "Diskoaren barne-hausturaren" kontzeptua proposatu zuen, disko errepikakorrak amaitzeko mikrotuak ekar ditzakeela adierazten duen "diskoaren barne-haustura" kontzeptua proposatu zuen. Formazioaren ondoren, nukleoaren pulposus-ek (NP) suntsipenak egin ondoren, erantzun autoimmune bat eragin dezake, eta horrek MC11 garapena dakar. Ma et al. Antzeko ikuspegia partekatu zuen eta NP-k eragindako autoimmunitazioak MC12-ko patogenesian funtsezko eginkizuna betetzen duela jakinarazi du.
Sistema immunologikoko zelulak, batez ere CD4 + T laguntzaile linfozitoak, funtzio kritikoa jokatzen dute Autoimmunity-en patogenesian13. Duela gutxi aurkitu den TH17 azpimultzoak PROINFLAMMAMORTORY CYTOKINE IL-17 ekoizten du, kimikoen espresioa sustatzen du eta organo hondatuetan T zelulak estimulatzen ditu IFN-γ14 ekoizteko. TH2 zelulek ere paper paregabea dute erantzun immunologikoen patogenesian. IL-4 adierazpena TH2 zelula adierazgarri gisa ondorio immunopatologiko larriak ekar ditzake15.
Ikasketa kliniko ugari MC16,17.18,19,20,21,22,23,23,23,23 izan arren, oraindik ere gizakiengan maiz gertatzen den MC prozesua imitatu dezakeen animalia eredu esperimentalen gabezia da oraindik Terapia zuzendutako etiologia edo tratamendu berriak ikertzeko erabiltzen da. Orain arte, MCko animalia eredu batzuk soilik jakinarazi dira azpiko bide patologikoak aztertzeko.
Albert-ek proposatutako teoria autoimmunearen arabera, ikerketa honek untxi mc eredu sinplea eta erreproduzigarria ezarri zuen Autotransplante NP bidez zulatutako ornodun muturreko plakaren ondoan. Beste helburu batzuk animalien ereduen ezaugarri histologikoak behatzea eta NPren espezifikoak ebaluatzea MCren garapenean. Horretarako, biologia molekularra, MRI eta ikasketa histologikoak bezalako teknikak erabiltzen ditugu, MCren progresioa aztertzeko.
Bi untxi hil ziren kirurgian zehar, eta lau untxi hil ziren Anestesian zehar MRI bitartean. Gainerako 48 untxiek bizirik atera ziren eta ebakuntza egin ondoren ez zuten portaera edo seinale neurologikorik erakutsi.
MRIk erakusten du zulo desberdinetako ehun kapsulatuaren seinalearen intentsitatea desberdina dela. NPE taldeko L5 ornodunen intentsitatearen intentsitatea 12, 16 eta 20 astetan aldatu zen txertatu ondoren (T1W sekuentziak seinale baxua erakutsi zuen eta T2W sekuentziak seinale mistoa eta seinale baxua) (1C irudia) (1C irudia), eta MRIren agerraldiak Beste bi zatietako bi taldeek nahiko egonkorra izan ziren aldi berean (1a, b).
(A) untxia lumbar bizkarrezurraren sekuentzial adierazgarria 3 denbora puntuetan. Ez da signal anormalik aurkitu xamur-operazio taldearen irudietan. (B) Me taldeko ornodun gorputzaren seinaleen ezaugarriak lotsagabeko taldekoen antzekoak dira, eta ez da seinale aldaketa esanguratsurik denboran zehar txertatze guneetan. (C) NPE taldean, seinale baxua argi eta garbi ikusten da T1W sekuentzian, eta seinale mistoa eta seinale baxua argi eta garbi ikusten dira T2W sekuentzian. 12 asteko epean 20 asteko aldira, T2W sekuentzian dauden seinale baxuen inguruko seinale altu esporadikoak gutxitzen dira.
Bistako hezur-hiperplasia NPE taldeko ornodunen inplantazio gunean ikus daiteke eta hezur-hiperplasia azkarrago gertatzen da 12 eta 20 aste bitartekoak (2C irudia) NPE taldearekin alderatuta, ez da aldaketa esanguratsurik ikusten modelatutako ornodunetan organoak; Sham Group eta Me Taldea (2C irudia) 2a, B).
(A) Gorputz ornodunaren gainazala inplantatutako zatian oso leuna da, zuloak ondo sendatzen du eta ez dago hiperplasia ornodun gorputzean. (B) Me taldean inplantatutako gunearen forma antzekoa da Sham operazio taldean, eta ez da aldaketarik egiten inplantatutako gunearen agerraldian denboran zehar. (C) hezur hiperplasia NPE taldeko inplantatutako gunean gertatu zen. Hezur-hiperplasia azkar handitu zen eta diska intervertebral bidez luzatu zen ornodun ornodun ornodunaraino.
Azterketa histologikoak hezur eraketari buruzko informazio zehatzagoa eskaintzen du. 3. irudian H & E-rekin orbanatutako atal operatiboen argazkiak erakusten dira. Sham-operazioko taldean, kondrozitoak ondo antolatuta zeuden eta ez da zelulen ugaritzerik antzeman (3a irudia). Me taldeko egoera horren antzekoa zen xaflaren operazioan (3b irudia). Hala ere, NPEko taldean, np itxurako zelulen ugaritze eta ugaritze ugari ikusi ziren inplantazio gunean (3C irudia);
(A) Trabeculae amaierako plakaren ondoan ikus daiteke, kondrozitoak ondo antolatuta daude zelulen tamaina uniformearekin eta forma eta ugaritasunik (40 aldiz). (B) Me taldeko inplantazio gunearen egoera Sham taldearen antzekoa da. Trabeculae eta kondrozitoak ikus daitezke, baina ez da inolako ugaritasunik inplantatzeko gunean (40 aldiz). (B) Ikus daiteke kondrozitoak eta NP bezalako zelulak nabarmen ugaritzen direla, eta kondrozitoen forma eta tamaina irregularra (40 aldiz) da.
Interleukin 4 (IL-4) MRNA, MRNA-k (IL-17) MRNA (IL-17) eta MRNA (IFN-) (IFN-) (IFN-) ikusi zuten NPE eta Me Taldeetan. Xede geneen adierazpen maila alderatzen zenean, IL-4, IL-17, eta IFN-γ-ren gene-adierazpenak nabarmen handitu ziren NPE taldean eta Sham operazio taldekoekin alderatuta (4. irudia) (P <0,05). Sham operazio taldearekin alderatuta, IL-4, IL-17, eta IFN-γ IFN--ren adierazpen-mailak apur bat handitu eta ez zen aldaketa estatistikora iritsi (P> 0,05).
IL-4, IL-17 eta IFN-γ-ren MRNA adierazpenak NPE taldean Sham operazio taldeko eta me taldekoak baino joera handiagoa erakutsi zuen (P <0,05).
Aitzitik, Me Taldearen adierazpen mailak ez zuen diferentzia esanguratsurik erakutsi (P> 0,05).
Western Blot analisia komertzialki eskuragarri dauden antigorputzak erabiliz egin zen IL-4 eta IL-17ren aurka, MRNA adierazpen eredua baieztatzeko. 5A, B irudietan erakusten den moduan, NPE taldeko IL-4 eta IL-17ko proteina-maila nabarmen handitu ziren (P <0,05). Sham operazio taldearekin alderatuta, IL-4 eta IL-17ren proteina-mailak ere ezin izan du estatistikoki esanguratsuak izan (P> 0,05).
(A) NPE taldeko IL-4 eta IL-17 proteinen maila nPE taldean eta plazebo taldean baino nabarmen handiagoa izan zen (P <0,05). (B) Western Blot histograma.
Kirurgian zehar lortutako giza lagin kopuru mugatua dela eta, MCko patogenesiaren inguruko ikasketa argiak eta zehatzak dira zertxobait zailak. MCko animalia eredua ezartzen saiatu gara mekanismo patologiko potentzialak aztertzeko. Aldi berean, ebaluazio erradiologikoa, ebaluazio histologikoa eta ebaluazio biologiko molekularra erabili ziren NP Autograft-ek eragindako MC ikastaroa jarraitzeko. Ondorioz, NP inplantazio ereduak 12 astetik 20 asteko orduko puntuko seinalea pixkanaka-pixkanaka-pixkanaka-pixkanaka-pixkanaka (T1W sekuentzietan eta seinale baxuan seinale baxua nahastuta), ehun aldaketak eta histologikoa eta molekularra adierazten ditu. Ebaluazio biologikoek azterketa erradiologikoaren emaitzak baieztatu zituzten.
Esperimentu honen emaitzek erakusten dute aldaketa bisual eta histologikoak NPE taldean ornodunen arau-hausteen gunean gertatu direla. Aldi berean, IL-4, IL-17 eta IFN-γ geneen adierazpena, baita IL-4, IL-17 eta IFN-γ ere behatu ziren, ornodunetan nukleoaren pulposus autologoaren arau-haustea dela adierazten duena Gorputzak aldaketa eta aldaketa morfologiko ugari sor ditzake. Erraza da animalien ereduaren ornodunen seinaleen ezaugarriak (T1W sekuentziaren seinale baxua, seinale mistoa eta seinale txikia T2W sekuentziaren barruan) oso antzekoak dira giza ornodunen zelulen eta MRI ezaugarriak ere Berretsi histologiaren eta anatomia gordinaren behaketak, hau da, ornodunen zelulen aldaketak progresiboak dira. Trauma akutuak eragindako hanturazko erantzuna apurka daitekeen arren, MRIren emaitzek erakutsi zuten, pixkanaka handitze-aldaketak areagotu ondoren 12 aste zurtoin ondoren eta 20 aste iraungo zuela eta MRI aldaketarik berreskuratu edo berraztertzeko seinalerik gabe. Emaitza hauek iradokitzen dute autologo ornodun NP untxietan MV progresiboa ezartzeko metodo fidagarria dela.
Zulaketa eredu honek trebetasun egokia, denbora eta ahalegin kirurgikoa behar ditu. Egitura paravatzaile parasentumalen aurkako esperimentuetan, disekzioan edo gehiegizko estimulazioetan osteofito ornodunen eraketa sor daiteke. Ondokoak hartu behar dira ondoko diskoak ez kaltetzeko edo narritatzeko. Penetrazioaren sakonera emaitza koherenteak eta erreproduzitzaileak lortzeko kontrolatu behar da, eskuz egin dugu entxufea 3 mm-ko orratz baten kaxa moztuz. Plug hau erabiliz zulaketa-sakonera uniformea bermatzen du ornodun gorputzean. Aurretiazko esperimentuetan, operazioan parte hartzen duten hiru zirujau ortopedikok 16 zabalera-orratzak errazago aurkitu zituzten 18 zabalera edo bestelako metodoekin. Zulatzean gehiegizko hemorragia ekiditeko, orratzari eusten dion bitartean, txertatze zulo egokiagoa eskainiko du, nolabaiteko mc-a modu horretan kontrolatu daitekeela iradokiz.
Ikerketa askok MCra zuzendu duten arren, gutxi da MC25,26,27ko etiologia eta patogenesiaren berri. Gure aurreko ikerketetan oinarrituta, autoimmunitazioak MC12 agerraldian eta garapenean funtsezko eginkizuna duela ikusi genuen. Azterketa honek IL-4, IL-17 eta IFN-γ-ren adierazpen kuantitatiboa aztertu zuen, hau da, CD4 + zelulen bereizketa bide nagusiak, antigeno estimulazioa egin ondoren. Gure ikerketan, NPE taldeak alderatuta, NPE taldeak IL-4, IL-17 eta IFN-γ eta IL-4 eta IL-17 proteinen maila ere handiagoa izan zen.
Klinikoki, IL-17 mrna adierazpena NP zeluletan handitzen da Disko Herniation28 gaixoekin. IL-4 eta IFN-γ adierazpen mailak konpresio gabeko disko herniazio eredu akutuan ere aurkitu ziren kontrol osasuntsuekin alderatuta29. IL-17-k funtsezko eginkizuna du hanturan, ehunen lesioetan gaixotasun autoimmuneak30 eta IFN-γ31-ri erantzun immunologikoa hobetzen du. IL-17 bitarteko lesio hobetua MRL / LPR MICE32 eta Autoimmunity-Suscepible Mice33-n jakinarazi da. IL-4-k proinflamatorio zitokinaren adierazpena inhibitu dezake (adibidez, IL-1β eta TNFα) eta makrofage aktibazioa34. IL-4ren MRNA adierazpena NPE taldean desberdina zela jakinarazi zen, IL-17 eta IFN-γ aldi berean; NPE taldean IFN-γ-ren MRNA adierazpena beste taldeetan baino nabarmen handiagoa zen. Hori dela eta, IFN-γ produkzioa NPren arteko lotura eragindako hanturazko erantzunaren bitartekaria izan daiteke. Ikerketek frogatu dute IFN-γ zelula mota anitzek sortzen dutela, aktiboki 1 telefono mugikorreko zelulak, hiltzaile naturalen zelulak eta makrofagiak35,36, eta erantzun immunologikoak sustatzen dituen Cytokine funtsezkoa da37.
Azterketa honek iradokitzen du erantzun autoimmuneak MCren agerraldian eta garapenean parte har dezakeela. Luoma et al. aurkitu da MCren eta NP nabarmenaren seinaleen ezaugarriak MRIren antzekoak direla eta biek seinale altua erakusten dute T2W sekuentzian38. Zitokina batzuk MCren gertakariarekin lotura estua izan dela baieztatu dute, hala nola IL-139. Ma et al. iradokitako NPren goranzko edo beheranzko protrusioak eragin handia izan dezakeela MC12 agerraldian eta garapenean. Bobechko40-ek eta Herzbein et Al.41-ek jakinarazi zuten NP jaiotzetik zirkulazio baskularrean sartu ezin den ehun immunotolaria dela. NP irteerak atzerriko gorputzak odol-hornikuntzan sartzen ditu, eta horrela, tokiko autoimmune erreakzioak bitartekatzen ditu42. Erreakzio autoimmuneak faktore immunologiko ugari eragin ditzake, eta faktore horiek ehunen aurrean etengabe jasaten direnean, seinaleztapen aldaketak eragin ditzakete43. Ikerketa honetan, IL-4, IL-17 eta IFN-γ gehiegizkoa da faktore immunologiko tipikoak, NP eta MCS44 arteko harreman estua frogatzen ere. Animalia eredu honek ondo imitatzen du NP aurrerapausoak eta amaierako plakan sartzea. Prozesu honek are gehiago agerian utzi zuen Autoimmunitatearen eragina MC-n.
Espero bezala, animalien eredu honek MC ikasteko plataforma posible bat eskaintzen digu. Hala ere, eredu honek zenbait muga ditu: lehenik eta behin, animalien behaketa fasean, zenbait untxi bitarteko untxiak eutanasia izan behar dute biologia proba histologiko eta molekularrentzat. Bigarrenik, hiru denbora puntuan ezarrita dauden, zoritxarrez, MC mota bakarra (aldatu dudan mota modikoa) modelizatu genuen, beraz, ez da nahikoa giza gaixotasunak garatzeko prozesua irudikatzea, eta denbora gehiago behar dira Hobe behatu seinale aldaketa guztiak. Hirugarrenik, ehunen egituraren aldaketak orban historologikoaren bidez argi eta garbi ager daitezke, baina teknika espezializatu batzuek hobeto agerian utzi dezakete eredu honetako aldaketa mikroestrukturalak. Adibidez, argi-mikroskopia polarizatua erabili zen fibrocartilagearen eraketa analizatzeko untxi intervertebral diskoetan45. NP-k MC eta Endplate-k epe luzeko efektuak azterketa gehiago behar du.
Zeelanda Zeelanda Zeelanda Zeelandoak (2,5-3 kg inguruko pisua), 3-3,5 hilabeteko pisua) ausaz banatu ziren Sham operazio taldean, gihar inplantazio taldean (me taldea) eta nerbio root inplantatzeko taldea (NPE taldea). Prozedura esperimental guztiak Tianjin Ospitaleko Etika Batzordeak onartu zituen, eta metodo esperimentalak egin ziren onartutako jarraibideen arabera.
S. Sobajima 46 teknika kirurgikoari hobekuntza batzuk egin dira. Untxi bakoitza alboko erreklamazio posizioan jarri zen eta bost lumbar intervertebral diskoteka (ivds) jarraian agertzen zen. Untxi bakoitza anestesia orokorra eman zen (% 20 uretanoa, 5 ml / kg belarriaren bidez). Larruazaleko ebakidura longitudinal bat saihetsen beheko ertzetik egin zen, 2 cm-ko ventral gihar parasentretara. L1-tik L6-tik bizkarrezurreko bizkarrezurreko bizkarrezurretik larruazalpeko ehunen gainazaleko ehunaren, ehunen berrordainearen eta muskuluen disekzio zorrotz eta gogorrarekin azaldu zen (6a irudia). Disko maila zehaztu zen L5-L6 disko mailaren mugarri anatomiko gisa. Erabili 16 zabalera zulatzeko orratza L5 ornodunaren amaierako plakaren ondoan dagoen zuloa zulatzeko 3 mm-ko sakonerara (6b. Irudia). Erabili 5 ml xiringa L1-L2ko disko intervertebralean nukleo pulposus bat egiteko (6C. irudia). Kendu nukleoaren pulposus edo giharrak talde bakoitzaren eskakizunen arabera. Zulagailuaren zuloa sakondu ondoren, sutura xurgagarriak faszia sakonean, azaleko faszian eta larruazalean jartzen dira, ornodun ornodunaren ehun periostealean ez kaltetzea kirurgian zehar.
(A) L5-L6 diskoa atzeraeraginezko ikuspegi postererolateral baten bidez azaltzen da. (B) 16 zabalera orratza erabili L5 amaierako zulotik gertu zulatzeko. (C) Autologoak MFS biltzen dira.
Anestesia orokorra belarriaren bidez% 20 uretan (5 ml / kg) administratu zen eta lumbar bizkarrezurraren erradiografiak 12, 16 eta 20 aste postoperatiboki errepikatu ziren.
Untxiak Ketamina (25,0 mg / kg) eta barneko sodio pentobarbital (1,2 g / kg) injekzio intramuscular bidez sakrifikatu ziren (1,2 g / kg) ebakuntza egin ondorengo 12, 16 eta 20 asteetan. Bizkarrezurra osoa analisi histologikoetarako kendu zen eta azterketa erreala egin zen. Alderantzizko transkripzio kuantitatiboa (RT-QPCR) eta Western Blotting faktore immunologikoetan aldaketak antzemateko erabili ziren.
MRI azterketak untxietan egin ziren 3,0 t iman kliniko (GE mediku sistemak, Florence, SC) adar ortogonaleko bobina hargailuarekin hornituta. Untxiak% 20 uretanoarekin (5 ml / kg) belarriaren bidez anestesizatzen ziren eta, ondoren, imanaren barruan supine jarri zuten Lumbar eskualdearekin 5 hazbeteko diametroko zirkular gainazaleko bobinarekin (GE sistema medikoetan) zentratuta. T2-ko haztutako lokalizazioko irudiak (TR, 1445 MS; TE, 37 ms) eskuratu ziren Lumbar diskoaren kokapena L3-L4 L5-L6-ra zehazteko. Sagittal Plane T2 haztatutako xerrak honako ezarpen hauekin eskuratu ziren: spin-oihartzun azkarreko sekuentzia 2200 m ms-ko errepikapen-denbora (TR) eta 70 ms-ko Echo Denbora (TE), Matrix; 260 eta zortzi estimulu ikusizko eremua; Ebaketa lodiera 2 mm izan zen, hutsunea 0,2 mm zen.
Azken argazkia atera eta azken untxia hil zen, lotsagabea, muskulua barneratua eta NP diskoak azterketa histologikorako kendu zituzten. Ehunak% 10eko bufferratutako% 10ean finkatu ziren astean 1, etilediazko azidoarekin decalcified eta parafinak. Ehunen blokeak parafinan sartu ziren eta mikrotomak erabiliz sagittal ataletan (5 μm lodiera) moztu ziren. Atalak hematoxilina eta eosina (H & E) zikindu ziren.
Talde bakoitzeko untxien arteko disko intervertebralak bildu ondoren, Uniq-10 zutabe bat erabiliz atera zen (Shanghai Sangon Bioteknologia Co., Ltd., Txina) fabrikatzailearen argibideen eta Improm II alderantzizko sistema (PROMEGA Inc.). , Madison, wi, AEB). Alderantzizko transkripzioa egin da.
RT-QPCR PRISM 7300 (Aplikatu Biosystems Inc., AEB) eta Sybr Green Jump Taq Readymix (Sigma-Aldrich, San Luis, Mo, AEB) hasi ziren fabrikatzailearen argibideen arabera. PCR erreakzio bolumenak 20 μl izan zituen eta 1,5 μL CDNA diluitu zituen eta 0,2 μm-ko primer bakoitzarena. Primerrak Oligoperfect diseinatzaileek diseinatu zituzten (inbertrogenoa, Valentzia, CA) eta Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Txina) (1. taula). Txirrindularitza termikoko baldintza termikoak erabili ziren: hasierako polimerasa aktibatzeko urratsa 94 ºC-tan 2 minutuz, eta gero 40 ziklo bakoitzeko 94 ºC-ko txantiloiaren desnaturalizaziorako, 1 minutuz 60 ° C-tan, luzapen eta fluoreszentziak. Neurriak 1 minutuz 72 ºC-tan egin ziren. Lagin guztiak hiru aldiz anplifikatu ziren eta batez besteko balioa RT-QPCR analisirako erabili zen. Anplifikazio datuak FlexStation 3 (gailu molekularrak, sunnyvale, ca, AEB) erabiliz aztertu ziren. IL-4, IL-17, eta IFN-γ Gene Adierazpena kontrol endogenoarekin normalizatu ziren (ACTB). Xede MRNAren adierazpen maila erlatiboak 2-δδct metodoa erabiliz kalkulatu ziren.
Proteina guztira ehunen homogeneizatzailea erauzi zen Ripa Lisys Buffer-en (proteasa eta fosfatasa inhibitzaileen koktel bat) eta ondoren 13.000 rpm-tan zentrifugatu zen 20 minutuz 4 ºC-tan 4 ºC-tan, 4 ºC-tan 4 ºC-tan ehuneko hondakinak kentzeko. BERRIKUNTZAREN MICROGRAMAK PROTEIKO PERTSONA PERTSONATU ziren,% 10 SDS-orrialdearen arabera, eta ondoren PVDF mintzara transferitu ziren. Blokatzea% 5 ez da esne lehorrean egin zen tris-buffered gazietan (TBS)% 0,1% tenperatura 1 h-ko tenperaturan. Mintzaren anti-dekorazioaren aurkako antigorputzaren aurkako untxia (1: 200 diluitua) inkubatu zen (1: 200, Txina) (diluitu 1: 200; bioss, Beijing, Txina) gau batez 4 ºC-tan eta bigarren egunetan erreakzionatu zuen; Bigarren mailako antigorputzarekin (ahuntzaren aurkako untxia immunoglobulina 1: 40.000 diluzioarekin) zaldizko peroxidasa (Bester, Wuhan, Txina) konbinatuta, ordu 1 tenperaturan. Mendebaldeko blot seinaleak kimikotasun kimikoengan izandako kimikuminismoaren ondorioz hauteman ziren X izpien irradiazioaren ondoren. Analisi desberdinetarako, brotxak bandscan softwarea erabiliz eskaneatu eta kuantifikatu ziren eta emaitzak xede genearen immunoreaktibitatearen ratioa izan da tubulina immunerantzibitatean.
Kalkulu estatistikoak SPSS16.0 software paketea (SPSS, AEB) erabiliz egin ziren. Azterketan zehar bildutako datuak ± bitarteko desbideratze estandarra (batez besteko ± sd) adierazi zuten eta bariantzaren (ANOVA) analisia analisia erabiliz analisia bi taldeen arteko desberdintasunak zehazteko. P <0,05 estatistikoki esanguratsua izan zen.
Horrela, MC-ren animalia eredua eratzea ornodun gorputza eta behaketa makroanatomikoa inplantatuz, MRI azterketa, ebaluazio histologikoa eta analisi biologiko molekularra gizakiaren mekanismoak ebaluatzeko eta ulertzeko eta terapeutiko berriak garatzeko tresna garrantzitsua bihur daiteke. Esku-hartzeak.
Artikulu hau nola aipatu: Han, C. et al. Aldaketa modikoen animalien eredua eratu zen nukleo-pulposus autologoak lumbar bizkarrezurraren hezur azpikontralean inplantatuz. Sci. 6, 35102: 10.1038 / SREP35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J. eta Boos, N. Erresonantzia magnetikoaren irudia lumbar bizkarrezurraren irudia: Diskoaren herniazioaren eta atxikipenaren, nerbio erroaren konpresioaren eta alderdiaren aurkako artrosia eta alderdiaren prebalentzia . tasa. Erradiologia 209, 661-666, DOI: 10.1148 / Erradiologia.209.3.9844656 (1998).
KJAER, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS eta Leboeuf-eed, K. Aldaketa modikoak eta aurkikuntza klinikoekin duten harremana. Europako Bizkarrezurreko Aldizkaria: Spine Spine Society, Europako Bizkarrezurreko Gizartearen eta Europako Elkartearen Europako Gizartearen Argitalpen Ofiziala 1512-1319, Doi: 10.1007 / S00586-006-0185-X (2006).
Kuisma, M., et al. Aldaketa moduak Lumbar ornodunen amaierako endizioetan: prebalentzia eta elkartzea bizkarreko mina eta sciatica adin ertaineko gizonezko langileetan. Bizkarrezurra 32, 1116-1122, Doi: 10.1097 / 01.0000261561.129444.ff (2007).
De Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K. eta Dalinka, M. Hezur-muineko MRI aldaketak amaierako plakaren ondoan, bizkarrezurraren bizkarrezurraren endekapenezko gaixotasunaren amaiera. Ajr. American Journal of Radiology 149, 531-534, DOI: 10.2214 / AJR.149.3.531 (1987).
Modic, Mt, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ eta Carter, Jr DisGenerative Disc gaixotasuna: MRI-rekin mihi ornodun aldaketak ebaluatzea. Erradiologia 166, 193-199, Doi: 10.1148 / Radiologia.166.1.33336678 (1988).
Modic, Mt, Masaryk, TJ, Ross, Js eta Carter, Jr Disko gaixotasun endekapenezko gaixotasunaren irudia. Erradiologia 168, 177-186, DOI: 10.1148 / Erradiologia.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Biztanleria orokorrean seinale aldaketa neoberteko (modikoak) seinaleztapen-aldaketak. Europako bizkarrezurreko aldizkaria: Spine Spine Society, Europako Bizkarrezurreko Gizartearen eta Europako Elkartearen Europako Elkartearen argitalpen ofiziala, Bizkarrezurreko Bizkarrezurreko Ikerketarako, 19, 129-135, DOI: 10.1007 / S00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB eta Mannisch, K. Lumbar Disc Herniation ondoren aldaketa modikoak. Europako Bizkarrezurreko Aldizkaria: Europako Bizkarrezurreko Gizartearen, Europako Bizkarrezurreko Gizartearen Argitalpen Ofiziala, Bizkarrezurreko Bizkarrezurreko Europako Elkartearen Europako Gizartea 16, 977-982, Doi: 10.1007 / S00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., L., Luoma, K., T., Gronblad, M., M. eta Kaapa, E. Mota modic aldaketak Disko deformazio deformazio-enpribatiboa azkar progresiboa izan daiteke: 1 urteko azterketa prospektiboa. Europako bizkarrezurreko aldizkaria 21, 1135-1142, DOI: 10.1007 / S00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ eta Zale, SW aldaketa modikoak: lumbar diskoaren endekapenari kausa eta ekarpenak. Hipotesi medikoak 73, 930-932, Doi: 10.1016 / J.Mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV diskoaren barneko haustura. Diskoaren prolapse arazoak 50 urtetik gorakoak. Bizkarrezurra (Phila PA 1976) 11, 650-653 (1986).
Posta: 2012-24- 13-13